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全波长酶标仪的原理与应用
  • 发布日期:2016-12-22      浏览次数:1738
    • 全波长酶标仪的原理与应用

      酶标仪(Microplate Reader)是对酶联免疫检测(EIA)实验结果进行读取和分析的专业仪器。酶联免疫反应是通过偶联在抗原或抗体上的酶催化显色底物进行的,反应结果以颜色显示,通过显色的深浅即吸光度值的大小就可以判断标本中待测抗体或抗原的浓度。酶标仪实际上就是一台变相的专用光电比色计或分光光度计,其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同。

      一、酶标仪的工作原理

          使抗原抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。使抗原抗体与某种连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,zui后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高,故可极大地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度

      光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光,进入塑料微孔极中的待测标本.该单色光一部分被标本吸收,另一部分则透过标本照射到光电检测器上,光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号.电信号经前置放大,对数放大,模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算,zui后由显示器和打印机显示结果. 微处理机还通过控制电路控制机械驱动机构X方向和Y方向的运动来移动微孔板,从而实现自动进样检测过程.而另一些酶标仪则是采用手工移动微孔板进行检测,因此省去了X,Y方向的机械驱动机构和控制电路,从而使仪器更小巧,结构也更简单.

      微孔板是一种经事先包理专用于放置待测样本的透明塑料板,板上有多排大小均匀一致的小孔,孔内都包埋着相应的抗原或抗体,微孔板上每个小孔可盛放零点几毫升的溶液.

      光是电磁波,波长100nm~400nm称为紫外光,400nm~780nm之间的光可被人眼观察到,大于780nm称为红外光。人们之所以能够看到色彩,是因为光照射到物体上被物体反射回来。绿色植物之所以是绿色,是因为植物吸收的大部分为红橙光和蓝紫光,但对绿色不吸收,反射出来,所以植物呈现为绿色。酶标仪测定的原理是在特定波长下,检测被测物的吸光值。

      随着检测方式的发展,拥有多种检测模式的单体台式酶标仪叫做多功能酶标仪,可检测吸光度(Abs)、荧光强度(FI)、时间分辨荧光(TRF)、荧光偏振(FP)、和化学发光(Lum)。

      酶标仪从原理上可以分为光栅型酶标仪和滤光片型酶标仪。光栅型酶标仪可以截取光源波长范围内的任意波长,而滤光片型酶标仪则根据选配的滤光片,只能截取特定波长进行检测。

      二、酶标仪的应用

           酶标仪广泛地应用在临床检验、生物学研究、农业科学、食品和环境科学中,特别在近几年中,由于大量的酶联免疫检测试剂盒的应 用,使得酶标仪在繁殖保健领域中应用越来越广泛,同时促进了繁殖健康技术水平提高。目前在国内血站临床试验室中酶标仪成为ELISA测定的重要工具。在农业中利用酶标仪研究酚氧化酶,为开发以该酶为靶标的新型害虫控制剂提供理论依据。伏马菌素是zui近发现的一族主要由几种真菌产生的结构相关的毒素代谢产物,该毒素已被世界卫生组织列为近年来首先进行研究的几种霉菌毒素之一。因此快速、的检测伏马菌素便显得尤为重要。在450nm或630nm的滤镜下使用酶标仪对微孔板进行光学测量,可以检测伏马菌素的含量,在食品安全方面有着重要的应用。生长曲线一般指菌落总数CFU/mI。或者菌落总数的对数log CFU/ml。随时间变化曲线,可用来展示微生物生长情况和新陈代谢规律。目前通过分光光度计测定菌悬液时存在即时性差、操作繁琐、易污染等缺点,由于酶标仪是一种快速、准确、高通量的仪器,所以我们总会选择使用酶标仪来进行菌悬液OD值的测定,来提高工作效率,节约时间。


       

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